酵母细胞的固定化实验操作

酵母细胞的固定化实验操作
〖实验流程〗
（一）制备固定化酵母细胞
（1）酵母菌的活化
　　活化就是处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态。
（2）配制物质的量浓度为0.05mol/L的

溶液
（3）配制海藻酸钠溶液
（4）海藻酸钠溶液与酵母菌细胞混合
（5）固定化酵母细胞
　　以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的

溶液中，并浸泡30min左右。
（二）用固定化酵母细胞发酵
（1）将固定好的酵母细胞用蒸馏水冲洗2-3次。
（2）将150ml质量分数为10％的葡萄糖溶液转移至200ml的锥形瓶中，再加入固定好的酵母细胞，置于25℃下发酵24h。
〖实验结果〗
（1）观察凝胶珠的颜色和形状
　　如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。
（2）观察发酵的葡萄糖溶液
利用固定的酵母细胞发酵产生酒精，可以看到产生了很多气泡，同时会闻到酒味。
〖注意事项〗
（1）配制海藻酸钠溶液：小火、间断加热、定容，如果加热太快，海藻酸钠会发生焦糊。
（2）海藻酸钠溶液与酶母细胞混合：冷却后再混合，注意混合均匀，不要进入气泡。
（3）制备固定化酵母细胞：高度适宜，并匀速滴入。
（4）配置

溶液时，溶解物质要彻底，勿用自来水溶解，以防自来水中各种离子影响实验结果。
（5）刚形成的凝胶珠应在

溶液中浸泡一段时间，以便Ca离子与Na离子充分交换，形成的凝胶珠稳定。检验凝胶珠是否形成，可用下列方法：用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果不容易破裂，没有液体流出就表明成功地制成了凝胶珠，还可以用手将凝胶珠在实验桌上用力摔打，如果凝胶珠很容易弹起，也表明制备的凝胶珠是成功的。
（6）凝胶珠的颜色和形状
　　如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。

固定化细胞技术<-->提取生物大分子的基本思路